By Martin Holtzhauer, Volkmar Hahn
In dem vorliegenden Buch werden biochemische Methoden und Stoffdaten zusammengestellt, die f}r grundlegende Arbeits- techniken h{ufig ben|tigt werden. Durch die Orientierung auf die Laborpraxis wurde zugunsten einer Obersichtlichkeit auf theoretische Er|rterungen verzichtet. Das Methodenspektrum reicht von quantitativen Bestimmungen }ber analytische und pr{parative Trennverfahren bis zu immunchemischen und Nukleins{ure-Sequenzanalyse-Methoden.
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2 Ob man ein Gel mit Polyacrylamid-Konzentrationsgradienten oder eines mit konstanter Polyacrylamid-Konzentration verwendet, ob man ein denaturierendes (SDS und/oder 2-Mercaptoethanol bzw. Dithiothreitol und/oder Hamstoff enthaltendes) oder ein nicht-denaturierendes 1 Als Richtwert fiir eine optimale Beladung von Proteinen mit SDS wird in der Literatur das Verhaltnis von 1,5 mg SDS pro Milligramm Protein genannt. 2 Eine Diskussion der PAGE-Systeme und ihrer Fehlermoglichkeiten wurde von Johnson gegeben.
2) zum Vergleich unterworfen werden. Losungen A 5% Essigsaure (v/v), 40% unverg. Ethanol (v/v) in dest. Wasser B 0,7% Periodsaure (w/v) in A C 1,4 ml 25%iger Ammoniak und 4,0 ml 1 N NaOH werden mit dest. Wasser auf 16,0 ml aufgefiiUt, dann werden 4,0 ml 20% AgN0 3 (w/v) tropfenweise so zugegeben, daB sich nach jedem Tropfen der bildende Niederschlag auf1asen kann. Die Lasung ist 7 Anstelle von Formalin kann Paraformaldehyd eingewogen und im Wasser gelost werden, anschlieBend wird die Saure zugegeben.
Nach der Elektrophorese wird die Zellulose im warmen Luftstrom getrocknet. Dann wird die Platte mit B eingespriiht und in einen auf 110 Eine ausfiihrliche Diskussion der Hydrolysebedingungen hinsichtlich der StabiliUit und damit Sicherheit quantitativer Bestimmungen von Phosphoaminosauren wurde von Bylund und Huang gegeben (D. B. Huang: Anal. Biochem. 73, 477-485 (1976». 6 40 Gelelektrophoretische Methoden bis 120 DC aufgeheitzten Trockenschrank gelegt, bis die Aminosaureflecke erscheinen. 32P-markierte Aminosauren werden durch Autoradiographie nachgewiesen (vgl.